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| Canal Fauna ·· Investigación ·· Vacunas conejo |
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El primer paso en la preparación de la vacuna transmisible consistió en la
selección de una cepa adecuada del virus mixoma para emplear como
virus parental en la construcción del recombinante. El abordaje consistió
en la realización de un amplio estudio de virulencia y difusión por
contacto de una colección de aislados de campo del virus mixoma
obtenidos en diferentes zonas geográficas.
La idea era que si se podía encontrar en la naturaleza un virus mixoma suficientemente atenuado,
este debería tener capacidad de transmisión conejo a conejo, puesto que
el virus estaba circulando en la naturaleza. Los resultados del estudio
(Bárcena y cols. 2000a) permitieron seleccionar la cepa 6918, que
presentaba ausencia de patología y
capacidad limitada de transmisión por
contacto conejo a conejo.
Una vez seleccionada la cepa 6918, se
construyó el virus recombinante ,
denominado 6918VP60-T2, adaptando
para ello procedimientos convencionales
para la obtención de poxvirus
recombinantes. El sistema se basa en la
capacidad de los poxvirus de
experimentar procesos de recombinación
homóloga en el citoplasma de células infectadas. Básicamente, el método
consiste en la inserción del gen exógeno de interés en la zona escogida
del genoma del virus mixoma. Para ello se requiere como paso intermedio
la construcción de un plásmido o vector de inserción que contenga el gen
que se desea insertar, situado bajo el control de un promotor de poxvirus
adecuado, y flanqueado por secuencias de DNA derivadas del genoma del
virus mixoma, que dirigen la inserción del
gen por recombinación homóloga en el lugar
escogido del genoma viral. De este modo se
insertó la secuencia del gen que codifica la
proteína VP60 del virus RHDV (Bárcena y
cols. 2000b). La VP60 es la proteína
estructural mayoritaria del virus. Se escogió
dicha proteína porque ha demostrado ser
altamente inmunógena y ser capaz de
conferir protección total frente a dosis
letales del virus RHDV, al ser suministrada a
conejos inoculada o por vía oral. El gen de la proteína VP60 se ha clonado
en multitud de sistemas de expresión heterólogos: Escherichia coli,
Sacaromices cerevisiae, baculovirus, vaccinia, canarypox y mixoma. En
todos los casos mencionados la proteína se ha mostrado eficiente en
términos de protección frente al virus RHDV y no se han descrito efectos
tóxicos o patogénicos asociados.
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